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大鼠腫瘤壞死因子α（TNF-α)ELISA試劑盒應(yīng)該怎么用？

α腫瘤壞死因子（TNF α）是一種主要由巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞產(chǎn)生的促炎細(xì)胞因子，并參與正常炎癥反應(yīng)和免疫反應(yīng)。α腫瘤壞死因子在許多病理狀態(tài)下產(chǎn)生增多，包括敗血癥、惡性腫瘤、心臟衰竭和慢性炎性疾病。在重癥類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的血液及關(guān)節(jié)中都可發(fā)現(xiàn)腫瘤壞死因子增多。是迄今為止所發(fā)現(xiàn)的直接殺傷腫瘤作用zui強(qiáng)的生物活性因子之一。分為TNF-α，TNF-β兩種，TNF家族除這兩種外還發(fā)現(xiàn)約30種。

操作步驟

• 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀 釋。

• 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl， 然后再加待測樣品 10µl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
• 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
• 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
• 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復(fù) 5 次，拍干。
• 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl，空白孔除外。
• 溫育：操作同 3。
• 洗滌：操作同 5。
• 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鐘。
• 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
• 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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