轉(zhuǎn)鐵蛋白（TF）單克隆包被抗體

有人認為單抗比多抗好，其實這并不是一個嚴謹?shù)挠^點，只能說在可能性上單抗的特異性更好一些，而多抗的親和力會優(yōu)于單抗，并且特異性并不一定就遜于單抗，主要看抗原的設(shè)計水平。目前商品化抗體里單抗主要是鼠單抗、兔單抗，多抗主要是兔多抗、山羊多抗等，其他種屬來源抗體較少。不建議糾結(jié)于單抗好還是多抗好，能做出實驗的抗體就是好抗體。

 在選擇上一般建議實驗種屬和抗體種屬親緣性越遠越好，不宜同源?？贵w不同種屬會要影響接下來二抗的選配。特別是在免疫熒光雙標實驗中，需要在區(qū)別于實驗種屬的基礎(chǔ)上，區(qū)分開兩個指標的抗體種屬來源，以便于二抗區(qū)別識別。

抗體選擇與使用過程中，多少還會遇到一些意想不到的事情。有些細節(jié)，還是需要多注意一些。如在選擇做阻斷或中和實驗時，有時需要將抗體加到細胞培養(yǎng)液中，這是需要注意抗體是否含有疊氮鈉。如果是大包裝的抗體，進行分裝是比較節(jié)約的方式，如果是高效價的，可以配成母液再分裝?？贵w的短時間運輸，用普通冰塊保持溫度是可以滿足要求的。

另外不要糾結(jié)于 WB 過程中分子量的問題。很多時候，我們看到同樣的抗體，不同的品牌，甚至同一品牌不同的貨號，標注的分子量都不一樣。其實可能只是生物試劑商只檢測時使用了不同的種屬不同的樣品類型，或是參照了不同的文獻，對使用者來說，同樣的樣品，不管使用哪個品牌的，只要抗體是對的，目的條帶只會出現(xiàn)在相同的位置。關(guān)于分子量的問題，一般不建議看產(chǎn)品說明，WB 中條帶的位置由樣品決定，并不會因為抗體不同而不同。所以在檢測蛋白之前，我們可以通過數(shù)據(jù)庫或參考文獻，對將要檢測的蛋白做個比較全面的了解，包括其可能剪切與修飾的情況、表型的情況等。在第一次使用一個新的抗體時，不要根據(jù)分子量橫向剪膜，可以保留幾個全泳道，看看條帶位置或分布的情況。

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